影響ELISA結(jié)果準(zhǔn)確性的外在因素
更新時(shí)間：2016-03-14 點(diǎn)擊次數(shù)：2149
目前，ELISA方法已被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。在臨床檢驗(yàn)及科研實(shí)驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常可見到一些錯誤結(jié)果。雖然ELISA測定中影響因素較多，其中包括在操作中有一定的技術(shù)要求，除此之外，外在因素更是影響甚大。本周一，我司技術(shù)部劉老師為廣大科研新手詳細(xì)整理了影響ELISA結(jié)果正確性的外在因素。
影響ELISA結(jié)果正確性的外在因素主要有：標(biāo)本的采集、貯存等不當(dāng)所致。如標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存過久、標(biāo)本凝集不全和采血管中添加物等影響。
（1）標(biāo)本溶血：由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色，干擾測定結(jié)果。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時(shí)必須注意避免溶血。
（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染：因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
（3）標(biāo)本保存不當(dāng)：在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性；標(biāo)本放置時(shí)間過長（如一天以上），有時(shí)抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
（4）標(biāo)本凝集不全：在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固，18~24h*凝固。臨床檢驗(yàn)工作中，有時(shí)為了爭取時(shí)間快速檢測，常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清，此時(shí)的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結(jié)果；這類情況于次日復(fù)查時(shí)因血凝已*，血清中不再有纖維蛋白原存在，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮浴楸苊馍鲜龈蓴_作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清，或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?br />（5）標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響：抗凝劑（如肝素，EDTA）、酶抑制劑（如NaN3可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性）及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。 綜上所述，對臨床檢驗(yàn)ELISA測定中出現(xiàn)的假陽性或假陰性結(jié)果，在考慮試劑因素和操作因素之外，更多的應(yīng)從標(biāo)本因素方面進(jìn)行分析，并應(yīng)采取相應(yīng)措施排除干擾作用。
