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技術文章

Technical articles
  • 2014

    10-9

    本周探討--細胞培養失敗的主要原因???

    消毒和滅菌微生物污染是造成細胞培養失敗的主要原因(一)物理消毒法1.紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射,可殺死多種微生物。革蘭陰性菌zui為敏感,其次是陽性菌,再次為芽孢,真菌孢子的抵抗力zui強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質等而使其滅活,間接作用是通過紫外線照射產生的臭氧殺死微生物。直接照射培養室消毒,用法簡單,效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關,輻射強度隨燈距離增加而降低,照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距...
  • 2014

    9-25

    小牛血清使用注意事項以及正確的凍存方法

    使用小牛血清時的注意事項具體如下:1.供血的新生小牛必須是健康牛的產仔,并在產后24小時內抽血,此期間不得吸取母乳。2.以無菌操作自頸動脈放血,并在無菌條件下分離血清及濾菌,全過程在36小時內完成。經濾菌的血清登一20IC保存。3.血清使用前需做細蔭、支原體培養及內毒素測定,在確實無污染的情況下方可使用。4.每批小牛血清測定總蛋白含量并分別配成10%,20%,25%于墓礎培養墓和HAT培養墓中,對骨髓瘤細胞和雜交瘤細胞進行培養,觀察小牛血清對瘤細胞和融合細胞的細胞毒性。若在2...
  • 2014

    9-23

    根據歷史起源來談“植物組織培養應用前景”

    19世紀30年代,德國植物學施萊登和德國動物學家施旺創立了細胞學說,根據這一學說,如果給細胞提供和生物體內一樣的條件,每個細胞都應該能夠獨立生活;1902年,德國植物學家哈伯蘭特細胞性的理論是植物組培的理論基礎。1958年,一個振奮人心的消息從美國傳向世界各地,美國植物學家斯蒂瓦特等人,用胡蘿卜的嫩皮的細胞進行培養,終于得到了完整植株,并且這一植株能夠開花結果,證實了哈伯蘭特在五十多年前關于細胞的預言。植物組培的簡單過程如下:剪接植物器官或組織——經過脫分化(也叫去分化)形成...
  • 2014

    9-23

    根據歷史起源來談“植物組織培養應用前景

    19世紀30年代,德國植物學施萊登和德國動物學家施旺創立了細胞學說,根據這一學說,如果給細胞提供和生物體內一樣的條件,每個細胞都應該能夠獨立生活;1902年,德國植物學家哈伯蘭特細胞性的理論是植物組培的理論基礎。1958年,一個振奮人心的消息從美國傳向世界各地,美國植物學家斯蒂瓦特等人,用胡蘿卜的嫩皮的細胞進行培養,終于得到了完整植株,并且這一植株能夠開花結果,證實了哈伯蘭特在五十多年前關于細胞的預言。植物組培的簡單過程如下:剪接植物器官或組織——經過脫分化(也叫去分化)形成...
  • 2014

    9-16

    ELISA法細胞凋亡檢測操作步驟

    細胞凋亡的發生是由于鈣-鎂依賴性核酸酶進入核小體間切割DNA,產生180bp~200bp或其倍數的核小體片段。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內切酶切割。采用雙抗體夾心酶免疫法,應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,與核小體片段形成夾心結構,可特異性檢測細胞溶解物中的核小體片段。常見樣本以及基本操作方法:1.收集細胞,離心后,用200µl溶細胞緩沖液重新懸浮,室溫下作用30min。(培養細胞的上清液、血漿和血清都可作為檢測樣...
  • 2014

    9-9

    大鼠胰島素ELISA試劑盒相關介紹

    胰島素是由胰島B細胞受內源性或外源性物質如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一種蛋白質激素。胰島素是機體內*降低血糖的激素,同時促進糖原、脂肪、蛋白質合成。大鼠胰島素ELISA試劑盒是一種酶聯免疫吸附技術,應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素(INS)水平。用純化的大鼠胰島素(INS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入胰島素(INS),再與HRP標記的胰島素(INS)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯...
  • 2014

    9-3

    探討“ELISA實驗重復性不佳及出現白板、陽性對照不顯色”

    (一)、重復性不佳可能原因及解決方法?1.樣品數量多少不一,加樣時間有長有短。重復某一樣品時,加樣時間盡可能與*次接近2.保溫時間不一致,洗滌條件不一致,操作人員不一致。重復測定標本,操作條件、人員等應盡可能與上次保持一致,以排除這些因素造成的不一致的可能性。3.加樣量不一致。樣本稀釋前應充分混勻,盡可能使用同一移液器并裝緊吸嘴。。(二)出現白板,陽性對照不顯色可能原因及解決方法?1.顯色液變質更換新的顯色液2.洗滌液配置有誤請按說明書所示稀釋倍數配制。3.未加酶結合物而認為...
  • 2014

    9-1

    在同一條件下做WB實驗為什么一張膜顯影,一張膜未顯影?

    近期恒遠經常接到客戶的:同一條件下,除了測的指標不一樣,為什么有張膜顯影,有張未顯影???上海恒遠技術分析:在同一條件下,如果一張膜顯影,一張膜未顯影,可以逐一查找原因:1、你是否兩張膜上都設有陽性對照?如果有,一張膜有信號,一張沒信號,可能是操作過程中有問題(可能原因是(1)、你結合底物會不會有問題,即沒有充分結合好,或者結合時間太短,(2)、你要確定兩張膜都是用新的底物反應液,(3)、就是沒有信號的膜會不會壓片時間太短,如果使用儀器掃片就不存在這種問題,)所以原因比較多,...
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